Ortam koşullarının Schizosaccharomyces pombe'de Rec12 Gen Anlatımı ve Homolog Rekombinasyon Üzerine Etkisi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: İstanbul Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Fen Fakültesi Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2016
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Deniz Yılmaz
Danışman: Semian Karaer Uzuner
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Schizosaccharomyces pombe'nin Rec12 geninin proteini, 345 amino asit içerir ve çapraz geçişli krosingoverli rekombinasyon için gereklidir. Homolog rekombinasyon, prokaryotik ve ökaryotik organizmaların genom kararlılığını sürdürmesinde önemli rol oynamaktadır. Bu çalışmada tek hücreli ve ökaryotik bir model organizma olan Schizosaccharomyces pombe'de çeşitli stres koşulları altında Rec12, gen anlatımı ve homolog rekombinasyonundaki değişikliklerin karşılaştırmalı olarak araştırılması amaçlanmıştır. Rekombinasyon frekansını artırmak için aynı kromozom üzerinde, birbirinden uzakta yerleşmiş genler bakımından mutan Schizosaccharomyces pombe ırkları İstanbul Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik laboratuvarının stoklarından seçilerek çaprazlandı ve %90 oranında zigot aşamasında bulunan hücrelere, CuSO4 ve H2O2 stresi uygulandı. Kontrol ve stres uygulanmış örneklerden, Random Spor Analizi yapıldı. Stres uygulanmış ve uygulanmamış zigotlardan RNA izole edildi ve revers transkripsiyon PCR yöntemi ile cDNA elde edildi. Gerçek Zamanlı PCR (RT-PCR) yöntemi kullanılarak, Schizosaccharomyces pombe Rec12 geninin farklı koşullardaki anlatımı değerlendirildi. Ayrıca stres koşullarının homolog rekombinasyon üzerine etkisinin anlaşılması için Random Spor analizi yöntemi ile elde edilen rekombinasyon frekansı, moleküler teknikler ile birlikte değerlendirildi. RT-PCR verileri ile karşılaştırılma yapıldığında, gen anlatımının azaldığı stres koşullarında, homolog rekombinasyon frekansında düşüş belirlendi. Florasan mikroskobu ile yapılan görüntülemede CuSO4 stresi uygulanmış askuslarının bazılarında morfolojik farklılıklar gözlendi.