Multipl Miyelom Hücre Hatlarında TMED9 Geninin Etkisinin Araştırılması

18. Tıbbi Biyoloji ve Genetik Kongresi, Ankara, Türkiye, 26 Ekim - 29 Aralık 2023, ss.69

Şeyma Punar¹; Burcu Salman Yaylaz¹; Sema Sırma Ekmekci¹; Neslihan Abacı¹

¹İstanbul Üniversitesi Aziz Sancar Deneysel Tıp Araştırma Enstitüsü, İstanbul, Türkiye

Amaç: Multipl miyelom (MM), plazma hücrelerinde anormal immünoglobulinlerin veya

immünoglobulin zincirlerinin aşırı üretilmesi ve birikmesi ile karakterize hematolojik bir malignitedir.

TMED9 geninin ürünü, endoplazmik retikulum (ER) zarında ifade edilen taşıyıcı proteindir. Daha

önce yaptığımız transkriptom çalışmasında MM hastalarında TMED9 geninin yüksek RPKM

değerinin olduğunu bulduk. Bu çalışmada MM’de TMED9'un protein transportundaki rolü sebebiyle,

hücre hatlarındaki işlevini araştırmayı amaçladık.

Yöntem: TMED9 gen ekspresyonu, MM hücre hattı olan U266 ve RPMI8226 hücre hatlarında

elektroporasyon yöntemiyle siRNA aracılı baskılanmıştır. Her iki hücre hattında TMED9 geni,

ekspresyon vektörü kullanılarak overeksprese edilmiştir. Gen ekspresyon seviyelerinin değişimi

qPCR ile belirlenerek ΔΔCT yöntemiyle hesaplanmıştır. TMED9'un protein seviyesindeki değişimleri,

Western blot ile analiz edilmiştir. Tüm deney gruplarında; apoptoz tayini için hücreler, Apopxin-Green

, 7-AAD ve CytoCalcein Violet boyalarıyla boyanarak konfokal mikroskopla görselleştirilmiştir.

Apoptotik ve canlı hücre sayılarının belirlenmesi için ImageJ programı kullanılmıştır. TMED9’un

hücre proliferasyonu üzerindeki etkisi MTT testiyle analiz edilmiştir.

Sonuç: TMED9 gen ekspresyonunun, U266 ve RPMI8226 hücrelerinde sırasıyla 24.saatte %74,

%78 ve 48. saatte %50, %65 oranında baskılandığı bulunmuştur. Vektör grubunda özellikle 24.

saatte TMED9 yüksek oranda eksprese edilmiş ve U266 hücrelerinde 100 kat, RPMI8226

hücrelerinde 80 kat arttığı bulunmuştur. TMED9'un baskılanması ve overekspresyonu,

kemilüminesans görüntülemeyle protein seviyesinde gösterilmiştir. MTT sonuçları siRNA ile

muamele edilen grupların hücre proliferasyonunun kontrol grubuna göre azaldığını ortaya

koymuştur. Özellikle 24. saatte U266 hücrelerinde %60, RPMI8226 hücrelerinde %45 oranında

hücre canlılığının azaldığı bulunmuştur. Apoptoz deney sonuçlarında her iki hücre hattında da 24. ve

48. saatlerde siRNA uygulanan gruplarda apoptotik hücre oranlarının %50’nin üzerinde olduğu

hesaplanmıştır. Öte yandan, TMED9 overekspresyonunun, kontrol gruplarına göre hücre canlılığını

ve proliferasyonunu arttırdığı gösterilmiştir.

Tartışma: Bu çalışmada, TMED9 gen ifadesinin baskılanmasının MM hücrelerinin canlılığını

azalttığını ve apoptozu tetiklediğini bulduk. Sonuçlarımız, TMED9'un farklı kanser türlerinde kötü

prognozla ilişkilendirildiği için MM’de umut vadeden bulgulardır. İlerleyen çalışmalarda bu ilişkinin

hangi yolaklar aracılığıyla meydana geldiğinin araştırılması planlanmaktadır. Bu çalışma U266 ve

RPMI8266 hücrelerinde TMED9 genini hedefleyen ilk fonksiyonel çalışmadır.

Anahtar Kelimeler: siRNA, TMED9, Kanser, Proliferasyon,