Akademik Veri Yönetim Sistemi
18. Tıbbi Biyoloji ve Genetik Kongresi, Ankara, Türkiye, 26 - 29 Ekim 2023, ss.75
Akut Miyeloid Lösemide SPINK2'nin Hücre Ölümü ve Proliferasyonu Üzerindeki
Rolünün Araştırılması
Berk İleri¹; Şeyma Punar¹; Zeliha Emrence¹; Burcu Salman Yaylaz¹; Neslihan Abacı¹; Sema Sırma
Ekmekci¹
¹İstanbul Üniversitesi Aziz Sancar Deneysel Tıp Araştırma Enstitüsü, İstanbul, Türkiye
Amaç: Kazal tip serin proteaz inhibitörü II ( SPINK2) Akut miyeloid lösemi (AML) hastalarında
yüksek eksprese olduğu tespit edilmiştir. Fakat yüksek SPINK2 ekspresyonun fonksiyonu AML’de
tam olarak aydınlatılamamıştır. Bu çalışmada, AML hücre hattı olan THP-1 hücrelerinde
SPINK2ekspresyonu lentivirus aracılı baskılanarak hücre proliferasyonu ve hücre ölümü üzerindeki
etkisi araştırılması amaçlanmıştır.
Gereç ve Yöntem: THP1 hücrelerinde SPINK2 ekspresyonunun baskılanmasının hücre
proliferasyonu üzerindeki etkisi MTT testi, hücre ölümü üzerindeki etkisi akan hücre ölçer cihazı,
western blot, ve qRT-PCR yöntemi ile incelenmiştir.
Sonuç: SPINK2 baskılandığında 24. saat diliminde hücre canlılığında %28, 48. ve 72. saat diliminde
sırasıyla %38 %40 oranında azalma olduğu belirlendi. Akan hücre ölçer cihazı ile yapılan analizlerde
SPINK2 baskılanmasının hücre canlılığında 24. saat diliminde %27 ,48. saat diliminde ise hücre
canlılığı %39 oranında azalma tespit edilidi. Pro/aktif-kaspaz3 antikoru ile yapılan western blot
analizleri sonucunda hem SPINK2 baskılanmış hücrelerde hem de kontrol hücrelerinde prokaspaz-3
proteini tespit edilmesine rağmen aktif kaspaz-3 görülmedi. Çalışmamız devam ederken SPINK2’nin
ferroptoz ile ilişkili olabileceğine dair bir çalışma yayınlandığından SPINK2’nin baskılanmasının
ferroptoz üzerine etkisini araştırıldı. SPINK2 baskılanan hücrelerde STEAP3 ekspresyonunda %90
oranında azalma saptanırken SLC7A11 gen ekspresyonunda değişim tespit edilmedi.
Tartışma: Bu çalışmada THP-1 hücrelerinde SPINK2’nin baskılanmasının hücre ölümü ile ilişkili
olduğu gösterilmiştir. Elde ettiğimiz sonuçlar SPINK2 baskılanmasına bağlı hücre ölümünün
kaspazlardan bağımsız şekilde gerçekleştiğini ve ferroptoz ile ilişkisi olmadığı yönündedir.
Çalışmamızın sonucu daha önce yapılan çalışma ile uyumlu olmaması, THP1 hücrelerinin TP53
mutasyonuna sahip olması ve STEAP3'ün p53 aracılı olarak ferroptoza neden olmasına bağlı olabilir.
AML’de en sık görülen TP53 mutasyonları kötü prognozla ve tedaviye direnç ile ilişkilidir. Yapmış
olduğumuz bu çalışmada TP53-/- delesyonuna sahip hücre soyunda SPINK2 ekspresyonunun
baskılanmasının hücre ölümüne neden olduğunu ve TP53 mutasyonu taşıyan AML hastalarının
tedavisinde SPINK2’nin hedef molekül olarak kullanabileceğini düşündürmektedir.
Anahtar Kelimeler: 3.Nesil Lentivirüs, Akut Miyeloid Lösemi, SPINK2 Ekspresyonu, Ferroptoz