Amaç: Lenfoid Enhancer Faktör1 (LEF1), LEF1/TCF (T hücre faktörü) transkripsiyon faktör ailesine aittir. LEF1, WNT sinyal yolunun ana transkripsiyon faktörü olarak fonksiyon göstermektedir. LEF1’in ayrıca TGF-b3 ve Notch sinyal yolu gibi b-kateninden bağımsız yolaklarda da rol aldığı gösterilmiştir. Önceki çalışmalarımızda Jurkat (akut lenfoblastik lösemi) hücrelerinde, LEF1’in genom üzerinde bağlanma bölgelerini bulmak amacıyla LEF1’e spesifik antikorla ChIP dizileme yaparak belirlediğimiz LEF1’in yeni transkripsiyonel hedeflerinden INSL5 ile ilişkisini göstermeyi amaçladık.

Gereç ve Yöntem: siRNA kullanarak LEF1’i baskıladağımız ve western blot ile doğruladığımız Jurkat hücrelerinde kantitatif RT-PCR ile INSL5 ekspresyonundaki değişim incelendi. Hiçbir geni hedeflemeyen siRNA (siRNA negatif kontrol) ile transfekte edilmiş hücreler ve ayrıca transfekte edilmemiş aynı koşullarda büyütülmüş hücreler kontrol olarak kullanıdı.

Sonuçlar: siRNA ile transfeksiyondan 24 saat sonra LEF1 ekspresyonu kantitatif RT-PCR ile analiz edildi. LEF1 siRNA’sı uygulanan hücreler, LEF1 NT-siRNA’ya göre %76 oranında (4,1 kat) baskılanmıştır. LEF1 baskılandığı durumda INSL5 ekspresyonunda değişiklik olup olmadığı kantitatif RT-PCR ile test edilmiştir. LEF1 siRNA kullanılarak baskılanan hücrelerde, siRNA negatif kontrole göre INSL5 ekspresyonun %73 oranla azaldığı gösterilmiştir.

Tartışma: Bu çalışmanın sonucunda INSL5’in LEF1’in hedefi olabileceği gösterilmiştir. Çalışmamız LEF1 ile ilişkili yolakların ve transkripsiyonel regülatör ağın daha iyi anlaşılmasına katkıda bulunacaktır.