AKUT MYELOİD LÖSEMİDE SPINK2'NİN HÜCRE ÖLÜMÜ VE PROLİFERASYONU ÜZERİNDEKİ ROLÜNÜN ARAŞTIRILMASI
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: İstanbul Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Aziz Sancar Deneysel Tıp Araştırma Enstitüsü Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2023
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: BERK İLERİ
Danışman: Sema Sırma Ekmekci
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Akut miyeloid lösemi (AML) hematopoez sırasında olgunlaşamayan öncül hematopeotik kök hücrelerinin kontrolsüz bir şekilde çoğalıp kemik iliği ve periferik kanda birikmesi ile oluşan bir hastalıktır. Gen mutasyonları ve sitogenetik değişimler AML gelişiminde önemli rol oynayan faktörlerdir. Tripsin inhibitörü olan SPINK2 serin proteaz ailesinin önemli üyelerinden biridir. SPINK2 geninin AML hastalarında ve AML hücre hatlarında normalden yüksek eksprese olduğu bulunmuştur. SPINK2 ekspresyon seviyesinin artması kötü prognozla ilişkilendirilmiştir. Artmış SPINK2 ekspresyonunun AML'deki fonksiyonu tam olarak aydınlatılamamıştır. Bu tez çalışmasında, AML hücre hattı olan THP-1 hücrelerinde SPINK2 ekspresyonunun etkisinin araştırılması amaçlandı. Bu kapsamda SPINK2 gen ekspresyonu kalıcı bir şekilde 3. Nesil lentivirüs aracılığı ile baskılandı. Gen ifadesinin baskılanmasının hücre proliferasyonu üzerindeki etkisi MTT testi ile belirlendi. Hücre ölümü analizleri akan hücre ölçer cihazı, apoptoz ile ilişkisi western blot ve ferroptoz ile ilişkisi ise qRT-PZR yöntemi ile incelendi. SPINK2'nin baskılanmasından 24 saat sonra hücre canlılığında %27,8, 48 ve 72. saat dilimlerinde ise %39 ve %40 oranında azalma belirlendi. Akan hücre ölçer cihazı ile yapılan analizlerde hücre canlılığı %15 oranında azalırken, apoptoz dışı hücre ölüm oranının %10 arttığı tespit edildi. Kaspaz3 antikoru ile yapılan western blot analizleri sonucunda aktif kaspaz3 ekspresyonu görülmedi. Bu sonuçlar SPINK2'nin apoptoz dışı hücre ölümü ile ilişkili olduğunu düşündürmektedir. SPINK2'nin baskılanmasının ferroptozda görev alan STEAP3 geninin ifadesinde %90 oranında azalmaya neden olduğu tespit edildi. Yapmış olduğumuz bu çalışmada, THP-1 hücreleri TP53 mutant olduğu için SPINK2'nin baskılanmasında görülen hücre ölümünün ferroptoz ile ilişki olmadığını düşündürmektedir