HeLa Hücre Kültürlerinde Apoptoz ve Moleküler Mekanizması
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: İstanbul Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Fen Fakültesi Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2009
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Uğur SERBES
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): Fatma Gül ÖZCAN
Açık Arşiv Koleksiyonu: AVESİS Açık Erişim Koleksiyonu
Özet:Bu çalışmada, kanser kemoterapisinde aktif olarak kullanılan bir kemoterapötik ajan olan Paklitaksel'in insan serviks karsinomu kökenli HeLa hücre soyu üzerine apoptotik etkisi ve bu etkinin moleküler mekanizması ele alındı. Öncelikle seçilen 6 doz (D1= 3 nM, D2= 7,5 nM, D3= 15 nM, D4= 30 nM, D5= 60 nM, D6= 120 nM) ile 48 saat boyunca hücre kültürleri inkübe edildi. Mitokondrial dehidrogenaz enzim aktivitesi analizi ile çoğalma hızları incelendi. 4'-6-Diamidino-2-fenilindol (DAPI) uygulaması ile floresan mikroskopta apoptotik indeks değerleri belirlendi ve sitotoksisite analizi ile karşılaştırılarak D3 dozu (D3= 15 nM) optimum doz olarak belirlendi.Belirlenen optimum doz (IC50) ile 48 saatlik süreçte hangi saatlerde en yüksek sitotoksisite ve apoptotik indeks değerlerine ulaşıldığının tespiti için 0- 48 saat (0s, 4s, 8s, 12s, 24s, 36s, 48s) zaman periyodunda D3 dozunun uygulandığı HeLa hücre kültürlerinde çoğalma hızı ve apoptotik indeks tespiti yapıldı. Sonuçlar 48 saatlik inkübasyon süresinde kontrole göre en yüksek sitotoksisite ve apoptotik indeks değerlerine ulaşıldığını gösterdi (p<0,05).D3 dozu (D3= 15 nM) ile 48 saat süre sonunda hücrelerde meydana gelen apoptozun moleküler seviyede tespiti için agaroz jel elektroforezi yöntemi ile DNA fragmentasyonu, Revers Transkriptaz Polimeraz Zincir Reaksiyonu (RT-PCR) tekniği ile apoptozda fonksiyonel bcl-2 gen ailesinin (mcl-1, bfl-1, bax, bcl-2, bak, bik, bcl-x) anlatımları ve floresan spektroskopi ile kaspaz 3, 7 ve 10 enzimlerinin zamana bağlı olarak aktivasyonları gösterildi (p<0,05).Sonuç olarak D3 dozunun 48 saat uygulanmasına bağlı olarak bcl-2 gen ekspresyonunun olmadığı ve bcl-x geninin ekspresyon seviyesinde kontrole göre bir azalmanın olduğu tespit edildi. Ayrıca çalışmada kaspaz 3, 7 ve 10 enzimlerinde saptanan aktivasyon ile, HeLa hücrelerinde Paklitaksel'in teşvik ettiği apoptozun kaspaz bağımlı apoptotik yol ile gerçekleştiği sonucu ortaya kondu.