Midye (Mytilus galloprovincialis Lam.) Manto Dokusundan Aspartat Aminotransferazın Saflaştırılması ve Bazı Özelliklerinin İncelenmesi
Tezin Türü: Yüksek Lisans
Tezin Yürütüldüğü Kurum: İstanbul Üniversitesi, Sağlık Bilimleri Enstitüsü, Cerrahpaşa Tıp Fakültesi Bölümü, Türkiye
Tezin Onay Tarihi: 2005
Tezin Dili: Türkçe
Öğrenci: Özlem DÖNMEZ
Asıl Danışman (Eş Danışmanlı Tezler İçin): AYŞE CAN
Özet:6. ÖZET Aspartat aminotransferaz (E.C.2.6.1.1.) hemen hemen bütün organizmalarda bulunan ve azot metabolizmasında anahtar role sahip olan piridoksal fosfata bağımlı bir enzimdir. Aspartat aminotransferaz aspartatın amino grubunu uygun bir a-keto aside aktararak glutamat oluşumunu sağlar. Aspartat aminotransferaz birçok bitkisel ve hayvansal kaynaktan saflaştırılmasına rağmen, bugüne kadar Mytilus galloprovincialis Lam. 'ın manto dokusundan saflaştırılmamıştır. Çalışmamızda Mytilus galloprovincialis Lam. midye türünün manto dokusundan aspartat aminotransferaz kısmen saflaştırıldı ve bazı kinetik özellikleri incelendi. İstanbul Boğazı Rumelikavağı kıyılarından toplanan midyelerin manto dokuları ayrıldıktan sonra, % 0.9 NaCI ile, homojenize edildi. Aspartat aminotransferaz aktivitesi gösteren homojenizatın %30-%65 amonyum sülfat kesiti elde edildi ve dializden sonra bu kesit hidroksilapatit kolona uygulandı. pH'sı 7.0 olan ve artan molaritede Na-K-fosfat tamponu ile yapılan basamaklı elüsyon sonucunda, aspartat aminotransferaz 100 mM Na-K-fosfat tamponu ile elüe edildi. Midye manto dokusu %30-%65 amonyum sülfat kesitinin hidroksilapatit kolon kromatografisine uygulanması ile elde edilen 100 mM Na- K-fosfat elüatının saflığını saptamak amacıyla yapılan poliakrilamid jel elektroforezinde gerek %30-%65 amonyum sülfat kesitinde gerekse 1 0OmM Na- K-fosfat elüatında tek bir aktivite bandı görülmesine karşın 100 mM Na-K-fosfat elüatında ikisi daha kalın olmak üzere üç protein bandı görüldü. Aspartat aminotransferaz aktivitesi üzerine sıcaklığın etkisi incelendiğinde aktivitenin 15°C ve 30°C'lerde en yüksek değerine ulaştığı ve 55°C'de tamamen kaybolduğu saptandı. Enzimin değişik pH'larda aktivitesinin incelenmesi sonucunda, en yüksek aktiviteyi, pH 7.2'de, tris-HCI tamponunda gösterdiği saptandı. Aspartat aminotransferazın aspartata ve 2-oksoglutarata karşı Km değerlerinin, sırasıyla 1.64 mM ve 2.2x1 0"2 mM, aynı substratlara karşı, Vmax değerlerinin ise 0.12 U/ml ve 0.168 U/ml olduğu saptandı. Anahtar kelimeler: Mytilus galloprovincialis Lam., aspartat aminotransferaz, enzim saflaştırılması, transaminazlar, aspartat aminotransferazın saflaştırılması. 43